（1）在外層鍋內加適量的水，將需要滅菌的物品放入內層鍋，蓋好鍋蓋并對稱地扭緊螺旋。
　　（2）加熱使鍋內產生蒸氣，當壓力表指針達到 33.78kPa時，打開排氣閥，將冷空氣排出，此時壓力表指針下降，當指針下降至零時，即將排氣閥關好。
　　（3）繼續加熱，鍋內蒸氣增加，壓力表指針又上升，當鍋內壓力增加到所需壓力時，將火力減小，按所滅菌物品的特點，使蒸氣壓力維持所需壓力一定時間，然后將滅菌器斷電或斷火，讓其自然冷后再慢慢打開排氣閥以排除余氣，然后才能開蓋取物。

　　二、高壓蒸汽滅菌器注意事項：
　　（1）待滅菌的物品放置不宜過緊。
　　（2）必須將冷空氣充分排除，否則鍋內溫度達不到規定溫度，影響滅菌效果。
　　（3）滅菌完畢后，不可放氣減壓，否則瓶內液體會劇烈沸騰，沖掉瓶塞而外溢甚至導致容器爆裂。須待滅菌器內壓力降至與大氣壓相等后才可開蓋。又名:高壓滅菌器,高壓滅菌鍋,高壓蒸汽滅菌鍋,手提高壓滅菌器,手提高壓滅菌鍋,手提式高壓滅菌器,手提式高壓滅菌鍋,手提式高壓蒸汽滅菌器,手提式高壓蒸汽滅菌鍋。
　　（4）裝培養基的試管或瓶子的棉塞上，應包油紙或牛皮紙，以防冷凝水入內。
　　（5）為了確保滅菌效果，應定期檢查滅菌效果，常用的方法是將硫磺粉末（熔點為115℃）或安息香酸（熔點為120℃）置于試管內，然后進行滅菌試驗。如上述物質熔化，則說明高壓蒸氣滅菌器內的溫度已達要求，滅菌的效果是可靠的。也可將檢測滅菌器效果的膠紙（其上有溫度敏感指示劑）貼于待滅菌的物品外包裝上，如膠紙上指示劑變色，亦說明滅菌效果是可靠的。
　　（6）現在已有微電腦自控型高壓蒸氣滅菌器，只需放去冷氣后，儀器即可自動恒壓定時，時間一到則自動切斷電源并鳴笛，使用起來很方便。